Pureté HPLC
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La chromatographie liquide haute performance (HPLC) est la norme de l’industrie pour mesurer la pureté des peptides. Lorsqu’un peptide affiche un pourcentage de pureté HPLC, ce chiffre devrait provenir d’un système HPLC calibré, utilisant généralement une colonne à phase inverse C18 avec un détecteur UV à 214 nm ou 220 nm. Chaque pic du chromatogramme représente une espèce moléculaire distincte ; l’aire sous le pic cible, exprimée en pourcentage de l’aire totale des pics, constitue la valeur de pureté. Pour les peptides de recherche, les valeurs de pureté très élevées doivent tout de même être examinées conjointement avec tout test de lot supplémentaire réellement réalisé, sans traiter la pureté comme une preuve d’identité moléculaire. Le choix de la longueur d’onde de détection UV a son importance : 214 nm capte directement l’absorption de la liaison peptidique et constitue le réglage le plus universel pour les peptides ; 220 nm est parfois utilisé pour supprimer le bruit de la phase mobile mais sous-estime l’absorbance pour les peptides dépourvus de résidus aromatiques. La HPLC en gradient (variation de la composition de la phase mobile au cours du temps) sépare des espèces étroitement apparentées - séquences tronquées auxquelles il manque un résidu, variants oxydés, résidus racémisés - qui co-élueraient en conditions isocratiques. Le rapport de pureté complet sur un certificat d’analyse devrait inclure le type de colonne, la phase mobile, le programme de gradient, le débit, la longueur d’onde de détection, le temps de rétention du pic cible et une copie du chromatogramme lui-même. Les examiner tous est le seul moyen de comprendre ce que signifie une valeur de pureté indiquée pour le lot concerné. Peptra Labs consigne ces paramètres dans les informations COA disponibles pour les lots éligibles.
Voir aussi
- Peptide
- Certificat d’analyse (COA)
- Spectrométrie de masse (MS)
Dernière mise à jour : 4 mai 2026